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熒光分光光度計(jì)的基本測(cè)定流程

更新時(shí)間:2021-03-30瀏覽:1961次

   熒光分光光度計(jì)的基本測(cè)定流程

  熒光分光光度計(jì)是一種常用的光度計(jì)產(chǎn)品,主要用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜,被廣泛用于多個(gè)行業(yè)中。今天我們主要來(lái)介紹一下它的基本特點(diǎn)及操作,希望可以幫助用戶更好的應(yīng)用產(chǎn)品。
  它能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。能夠?qū)?jīng)光源激發(fā)后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)或經(jīng)化學(xué)處理后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)成份分析,可應(yīng)用于生物化學(xué)、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化工等部門(mén),可以說(shuō)是有很重要的用途。
  基本測(cè)定:
  (1)熒光激發(fā)光譜測(cè)定
  設(shè)置熒光分光光度計(jì)參數(shù),掃描發(fā)射波長(zhǎng),找到maxλem,以此為發(fā)射波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長(zhǎng)的函數(shù),便得到激發(fā)光譜。
  (2)熒光發(fā)射光譜測(cè)定
  設(shè)置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長(zhǎng),找到maxλex,以此為激發(fā)波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系,便得到熒光發(fā)射光譜。
  (3)差譜測(cè)定
  設(shè)置儀器參數(shù),選擇合適的工作方式,測(cè)定背景溶液的發(fā)射光譜并儲(chǔ)存起來(lái),在一定的工作方式下,掃描樣品溶液的發(fā)射波長(zhǎng),得到當(dāng)時(shí)的光度值和儲(chǔ)存的背景值之間的差示值,即差譜。
  (4)峰面積積分
  選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞剑瑢?duì)樣品溶液進(jìn)行積分操作,即得到峰面積積分。
  (5)熒光強(qiáng)度
  選擇合適的測(cè)量參數(shù),設(shè)置λex、λem,采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式,即可測(cè)得所選波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度。
  (6)定量測(cè)定
  配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在一定的測(cè)定條件下,設(shè)置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度,繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線,不改變熒光分光光度計(jì)參數(shù)測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。

 

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